1R-1. 올바른 micropippette 사용법에 대해서 설명하라.
-micropippette의 기본적인 설명
: micropippette의 용량의 단위는 microliter 이다. 용량은 micropippette 손잡이에 붙어있는 라벨로 알 수 있다.
그림 일반적으로 많이 사용하는 네 가지
종류의 micropippette
사진에서 왼쪽으로부터 1000 microliter (이것만 파란색
갖는 아가로스겔(agarose gel)이나 폴리아크릴아마이드겔(polyacrylamide gel)을 사용한다. 이러한 지지체 내에서 작은 물질은 빠르게, 큰 물질은 느리게 이동하므로 분자량에 따라 시료를 분리할 수 있다. 또한 시료의 이동거리와 분자량은 거의 반비례하므로 전기영동을 이용하여 분자량을 결정할 수 있다.
2. Method
[실험재료]
premix, template & primer, D.W, mineral oil, thermocycler(PCR기계), Seakem LE agarose, gel caster, 1×TAE, EtBr, 마이크로피펫, 1.5㎖ tube
[실험방법]
① premix가 들어있는 20㎕ tube에 template DNA 1㎕, primer 2㎕를 D.W 17㎕를 넣고 잘 섞기 위해 vortexing 해준다.
② 적당하게 centrifuge 해준다.
- vortexing 시에 위로
전기가 흐르고 있다. 그리고 그물 망 구조를 가지고 있는 agarose gel이 있다. 그래서 well에 DNA를 loading하게 되면 크기와 무게, 모양에 따라서 많이 이동할 수도, 적게 이동할 수 있다. 이 차이를 가지고 어느 band가 어떤 물질을 가지고 있는지를 확인할 수 있다.
① Agarose gel전기영동 시 DNA의 이동에 영향을
1.실험 목적
- 분리한 plasmid DNA를 제한효소로 처리하고, 전기영동법과 PCR을 이용하여
DNA를 분리하고 확인하는 기술을 습득한다. 제한효소의 종류에 따른 절단 방식을
알아본다.
2. 실험 원리
1) 제한 효소 (Restriction enzyme)
(1) 제한 효소의 정의
* 제
DNA > linear DNA > open circular DNA
d. 전압이 높을수록 이동속도가 빠르다.
e. 전기장의 방향도 이동속도에 영향을 미친다.
f. Ethidium bromide는 DNA 이동속도를 15%정도 감소시킨다.
g. 전기영동 buffer의 성분과 이온강도도 electrophoresis speed에 영향을 미친다.
2) DNAloading buffer
Agarose gel의 well에 DNA를 넣어 줄 때, DNA
1.실험 목적
- 분리한 plasmid DNA를 제한효소로 처리하고, 전기영동법과 PCR을 이용하여
DNA를 분리하고 확인하는 기술을 습득한다. 제한효소의 종류에 따른 절단 방식을
알아본다.
2. 실험 원리
1) 제한 효소 (Restriction enzyme)
(1) 제한 효소의 정의
* 제
진핵 생물의 경우, 비발현부위(인트론; Intron)가 같이 나오는 등 여러 가지 문제점이 있다. 그것을 해결하기 위해 특정 유전자에 시발체를 붙인 다음, PCR을 DNA수준이 아닌 RNA나 단백질 수준에서 하는 역전사-PCR 즉 RT(Reverse Transcriptase)-PCR이 있다.
Ⅱ. 실험재료 및 방법 (Materials and Methods)
1. 실험 재료
gel electrophoresis)에 의한 유전자의 분리
a. Agarose gel전기영동 시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들로는 DNA의 분자의 크기, Agarose의 농도, DNA 형태에 따라 이동속도가 다르다. 또 전압이 높을수록 전기장의 방향, Ethidium bromide, 전기영동 buffer의 성분과 이온의 강도도 전기영동 속도에 영향을 준다.
b. DNAloadi